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发布时间:2020-09-08 16:03    作者:.    来源:荷斯坦杂志    查看:
    2020年8月11日晚我获某大型奶牛养殖集团紧急技术咨询如下:张老师咨询个问题:我们集团现在有个牧场,泌乳牛3400头左右。7月26日首次发病,刚开始发病10头,其中2头是头胎牛,自8月1日后发病增多,泌乳牛群约30%的奶牛乳房皮肤出现不明原因的出血斑点,然后溃烂、结痂;病变仅限于乳头基部和乳房下端皮肤和乳区皮肤;发病初期会有疼痛,结痂后很少再有疼痛发现。前、后药浴液使用游离碘浓度分别是2500ppm/7500ppm;该场近19个月(2019年2月至2020年8月)原奶卫生质量统计数据显示:月平均临床乳房炎为1.4%(0.8%-1.9%),体细胞平均数为17.2万(16.1-26.5万),大罐奶样微生物平均数为0.4万(0.1-0.8)。舍内室温15-26摄氏度,使用沼渣为垫料;头胎发病110头(头胎泌乳牛总数1184头),蚊蝇防控做得不好,卧床和牛体上可见苍蝇。现附上临床症状数张,参见图1,烦请百忙之中拨冗帮助我们解决。


    一、如何破解?

    该场泌乳牛3400余头,既往近19个月期间(2019年2月至2020年8月)原奶卫生质量统计数据显示:月平均临床乳房炎为1.4%(0.8%-1.9%),体细胞平均数为17.2万(16.1-26.5万),大罐奶样微生物平均数为0.4万(0.1-0.8万);即使在全球同行业对擂,业绩也属上乘表现。虽然从所发照片可看出卧床管理仍有需要改善之处,但因长达近19个月期间临床乳房炎月平均发病率仅为1.4%(0.8%-1.9%),优于行业标准1.5%,所以病因学破解突破点并不可完全归咎于憩息环境差和卧床管理不到位。该病自7月26日首先发病10头,至8月1日迅速在全群蔓延扩散,具有鲜明的传染性极强和极快特征,这自然大大压缩了大海捞针似漫天诊断遐想,而应将关注重点放在:究竟哪些传染性致病微生物可造成奶牛乳头及其邻近乳区皮肤损伤?
    
    二、哪些传染性致病微生物可造成乳头及其邻近乳区皮肤损伤?

    造成乳头及其邻近乳区皮肤损伤的传染性致病微生物可细分为如下九类:

    1、牛乳头瘤病毒。

    2、牛疱疹病毒2型/4型(Bovine Herpes Virus 2: BHV-2; Bovine Herpes Virus 4: BHV-4)。

    3、牛痘病毒。

    4、伪牛痘病毒。

    5、口蹄疫病毒。

    6、牛毛癣菌。

    7、金黄色葡萄球菌。

    8、前庭口炎病毒。

    9、厌氧坏死梭形菌。

    对照以上9类不同传染性致病微生物造成乳头及其邻近乳区皮肤损伤特征,以及感染至发病潜伏期长短,可基本锁定属牛疱疹病毒2型/4型感染损伤(潜伏期4-10日)。又由于牛疱疹病毒4型属γ疱疹病毒亚科新成员,对牛类动物血管内皮细胞、乳腺组织、子宫内膜、胎儿组织均有很强亲和力,并造成相应严重损伤,而该场罹病牛并不伴发这些关联临床症状,故可暂时排除牛疱疹病毒4型感染假设。不过,牛疱疹病毒2型感染损伤常致乳头及其临近乳区皮肤表层溃疡,临床特征与病程长短与该场罹病牛所见吻合。1957年在非洲首次发见牛疱疹病毒2型感染乳头及其临近乳区临床病例,称为牛疱疹病毒2型乳头炎(Bovine Herpes Mammillitis: BHM);继后不少国家相继有此病报道,我国于2000年9月初次确诊本病,随后各地陆续零星发生。基此,初步诊断为牛疱疹病毒2型乳头炎。为进一步确证初步诊断,现场采集10头痊愈牛病变部位结痂样品送四川农业大学曹随忠校长团队(反刍动物疾病研究中心)应用PCR技术检测牛疱疹病毒2型。

    三、四川农业大学检测结果如何?

    检测报告

    1、样品信息

   (1)收样日期:2020年8月20日。

   (2)样品种类:10份痂皮,参见图2。

    2、检测要求

    检测牛疱疹病毒2型。
    3、样品处理

    对10份液体样品提取DNA,同时将样品中的痂皮混合成两个样品研磨后提取DNA。进行牛疱疹病毒2型特异性PCR验证。

   (1)检测用品信息,参见表1。

   (2)检测引物信息,参见表2(牛疱疹病毒2型参考序列号为M21628)。


    4、PCR检测结果

    参见图3.

    5、初步诊断结论

    PCR结果显示5号和6号样品出现目的条带,约为500bp,与目的条带大小一致,说明样品中存在牛疱疹病毒2型;但条带暗淡且模糊,可能缘于样品病毒载毒量较小或采样时间不恰当等原因造成DNA模板质量不高,影响PCR过程。牛疱疹病毒2型在疱疹液内含量很高,在发病初始阶段采取疱疹液样品容易分离和鉴定病毒,但供检测的10个样品均采自罹病牛损伤乳头及其邻近乳区业已痊愈的皮肤痂。

    四、中美两国诊断本病效率如何?

    我曾在美国明尼苏达州政府兽医诊断实验室(全美每个州均设置本州兽医诊断实验室)工作多年,本病从2020年8月11日报告,至8月26日初步破解,历时15日,而我们美国同行大约只需不足4日即可破解,现将两国破解流程中各环节时长差异藉表3简洁说明。

    五、如何正确治疗牛疱疹病毒2型乳头炎?

    因属病毒感染致病,故本病暂无特效疗法,只能对症治疗和采取支持疗法。对业已发病牛,可选下列任何一种溶液涂敷患部:10%甘油聚维酮碘、碘甘油,或10%甘油去腐生肌散;如欲防止夏季蚊蝇骚扰,可涂敷万金油或薄荷油;早期发病痛感强烈患牛可给予非固醇类抗炎药物缓解;这些处理均可加快愈合过程;一般轻症病例5-7日即可痊愈,严重病例则需要2-3周左右时间恢复;应始终警惕继发临床乳房炎风险。

    六、如何正确预防牛疱疹病毒2型乳头炎?

    牛疱疹病毒2型乳头炎目前尚无市售特异疫苗可用。比较可行的现场有效预防措施如下:

    1、设立隔离圈留置罹病牛并最后挤奶。

    2、注意挤前用含游离碘5000PPM药浴液充分浸泡乳头到位并滞留逾30秒。

    3、用含70%酒精湿纸巾擦干净乳头后再套杯。

    4、夏季应用10%甘油含游离碘10000PPM后药浴;冬季可使用高含量脂肪酸乳头防冻液。

    5、加强夏季消灭蚊蝇工作。

    6、一旦牛群感染本病,即非常难以彻底净化。因本病常由头胎牛始发,所以需要特别加强关注头胎新产牛,一旦发现症状即刻隔离和治疗,避免进一步在全群扩散。

    七、还需要知道牛疱疹病毒2型乳头炎哪些信息?

    1、疱疹病毒传染病是如何被人类逐渐认识与理解的?

    疱疹病毒感染疾病早在古希腊时期就已流行,系已知最古老的性传播感染疾病之一,西欧各国史书曾记录了本病的基本症状和诸多治疗措施,但当时治愈率并不高;疱疹病毒传染病仅只是在近数百年方被人类逐渐认识和透彻理解。众所周知,希波克拉底(公元前460-370)曾描述了疱疹单纯病变的皮肤传染病,疱疹这个词取自希腊文“疱疹(Herpes)”,意思“蠕变或爬行”,形象地描述了疱疹皮肤病变的传播方式和性质。甚至莎士比亚也熟悉复发性疱疹单纯病变及其传播特点。在《罗密欧与朱丽叶》中,莎士比亚如此描写玛布王后:“欧尔女士们的香唇直接交互亲吻如醉如痴,其中愤怒的玛布王后罹患水泡瘟疫,因为聚集者的呼吸和招待糖果均被污染。” 然而,直到1893年,法国科学家埃米尔·维达尔才通过实验证明疱疹可从一个人传染给另一个人。

    2、牛疱疹病毒能造成牛类动物哪些疾病?

    几类疱疹病毒科亚科病毒如α疱疹病毒和γ疱疹病毒常感染牛致严重疾病,如大家熟悉的牛疱疹病毒1型(BHV-1)常致牛传染性鼻气管炎、传染性脓疱性外阴阴道炎和传染性龟头炎。而牛α疱疹病毒2型(即牛疱疹病毒2型)与人类疱疹病毒1型抗原性相关,常致感染牛发生两种明显独特截然不同疾病:

   (1)类似于牛传染性皮肤结节病(由痘病毒引起)的伪牛皮肤结节病,这两种牛皮肤结节病临床难以鉴别诊断。

   (2)牛溃疡性乳头炎,也称牛疱疹乳头炎,或牛疱疹病毒2型乳头炎。

    3、牛疱疹病毒2型传染病流行情况如何?

    牛疱疹病毒传染病分布于世界各地。伪牛皮肤结节病首先在南非被报道,继之向非洲中部和北部、东欧、西亚、中亚、中国以及美国和澳大利亚逐渐扩散。牛疱疹病毒2型乳头炎临床病例则在英国、爱尔兰、保加利亚、意大利、法国、澳大利亚、美国、加拿大、卢旺达、布隆迪、赞比亚、巴西、巴基斯坦和中国均有零星报道。同时,比利时、荷兰、新西兰、南非和纳米比亚亦获得了牛疱疹病毒2型感染的血清学证据。新近,在非洲、亚洲和匈牙利亦报道牛疱疹病毒2型抗体检测或几种无症状野生动物该病毒DNA检测的阳性结果,表明牛疱疹病毒2型感染远较临床病例更多。德国2020年5月24日宣布,依据该国6801头奶牛普查结果,至少目前德国奶牛群不存在牛疱疹病毒2型感染风险。

    4、牛疱疹病毒2型传染途径如何?

    迄今为止,牛疱疹病毒2型自然传染模式尚未透彻了解清楚,除直接接触传染外,还可经挤奶和蚊蝇叮咬传染,如吸血厩蝇。假如乳头皮肤完整,则牛疱疹病毒2型不易侵袭致病;因此,乳头皮肤损伤常为诱发本病的风险因子之一。牛疱疹病毒2型除经感染牛破损皮肤排出外,也能经口鼻甚至阴道排出。此外,在健康牛三叉神经节也曾检出过牛疱疹病毒2型。回归该奶牛养殖集团属下该奶牛场,我们并未破解该场牛疱疹病毒2型原发何处。

   (曹随忠  四川农业大学 教授;徐双 某奶牛养殖集团 原奶质量总监;芦彪 四川农业大学反刍动物疾病研究中心 硕士研究生;张廷青 博士)

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